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中文名称:乙酰胆碱酯酶(AchE)活性检测试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:AchE(Acetylcholinesterase)属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach) 水解,在神经传导调节中起重要作用。
AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB 在 405nm 处有吸收峰,通过测定 405nm 吸光度增加速率,计算 AchE 活性。
1. 标准曲线绘制:以吸光度值为横坐标,标准品浓度为纵坐标,绘制标准曲线y =kx+ b,x为吸光度值,y为标准品浓度浓度(μg/mL)。根据标准曲线,将ΔA带入公式计算出样本浓度(y,μg/mL);
2. 血清样本乙酰胆碱酯酶(AchE)计算
单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1μmol 巯基的量为一个活力单位。
计算公式:乙酰胆碱酯酶(AchE)(U/mL)=y ÷ T
3. 组织、细胞样本ACP计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每毫克组织蛋白每分钟分催化产生1μmol 巯基的量为一个活力单位。
计算公式:乙酰胆碱酯酶(AchE)(U/mg prot)=y × V样 ÷ ( V样 × Cpr) ÷ T
(2) 按样本鲜重计算
单位定义:每克组织催化产生 1μmol 巯基的量为一个活力单位。
计算公式:乙酰胆碱酯酶(AchE)(U/g)=y × V样 ÷ ( W × V样 ÷ V样总 ) ÷ T
(3)按照细菌或细胞数量计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol 巯基的量为一个活力单位。
计算公式:乙酰胆碱酯酶(AchE)(U/104 cell)=y × V样 ÷ ( 500 × V样 ÷ V样总) ÷ T
V样:加入样本体积,0.02mL;
V样总:加入提取液体积,1 mL;
T:反应时间,10min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
500:细胞/细菌数,500万;
1. 实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测;
2. 测定过程中样本和工作液在冰上放置,以免变性和失活。